食物中胆固醇的测定方法_安徽皖仪科技股份有限公司

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食物中胆固醇的测定方法

发表日期: 2017-12-02     点击击数:851

食物中胆固醇的测定方法主要有气相色谱法和比色法。色谱法必须具备气相色谱仪,此仪器价格昂贵,故在国内不易普及,因此选用经济、简便、实用的比色法进行食物中胆固醇的测定。

  比色法

  1.原理

  固醇类化合物与酸试剂作用,可脱水,发生聚合反应并产生强的颜色反应。

  2.适用范围

  此方法适用于动物性食物中胆固醇的测定。

  3.仪器

  (1)实验室常用设备

  (2)分光光度计

  (3)电热恒温水浴

  4.试剂

  所有试剂,如未注明规格,均指分析纯,所有实验用水,均为蒸馏水。

  (1)石油醚

  (2)无水乙醇

  (3)浓硫酸

  (4)冰乙酸(优级纯)

  (5)磷酸

  (6)胆固醇标准(美国Sigma公司)

  标准储备液:准确称取胆固醇100mg,(胆固醇标准开启后放在干燥器内)溶于冰乙酸中,并定溶至100ml。其浓度为1g/L。可保存2个月。

  标准工作液:取标准储备液10ml,用冰乙酸定溶至100ml。其浓度为0.1g/L。此液用时临时配制。

  (7) 铁矾显色液:

  储备液:溶解4.463克硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2·12H2O]于100ml 85%磷酸中贮于干燥器内,此溶液在室温中稳定。

  * 铁矾储备液须在实验前两周配制,因硫酸铁铵不易溶解,每天要进行短时间的振摇待溶质完全溶于磷酸后再定溶到体积。

  工作液:吸取储备液10ml用浓硫酸稀释到100ml。贮于干燥器内。

  (8)氢氧化钾50%溶液:溶解50g氢氧化钾于水中,定溶至100ml。

  (9)氯化钠5%溶液:溶解5克氯化钠于水中,定溶至100ml。

  (10)纯氮(99.99%)

  5.操作步骤

  5.1样品脂肪的提取与测定:根据食物种类分别用索氏提取法、研磨法和罗高氏法提取脂肪,并计算出每100克食物中脂肪含量。

  5.2 样品胆固醇的测定:准确称取提取的油脂3-4滴(约含胆固醇300-500μg) 取样量可按样品中胆固醇的浓度增减。置于25ml试管内,加入4ml无水乙醇,0.5ml50%氢氧化钾,在65℃恒温水浴中皂化1小时。皂化时每隔 20-30分钟振摇一次使皂化完全。皂化完毕,取出试管,冷却。加入3ml 5%氯化钠、10ml石油醚,盖紧玻璃塞,振摇2分钟,静置分层(一般需1小时以上)。

  取上层石油醚2ml,置于10ml具玻璃塞的试管内,在65℃恒温水浴中用氮气吹干,加入4ml冰乙酸,2ml铁矾显色液,混匀,放置15分钟后560-575nm下比色。

  5.3标准曲线:准确吸取胆固醇工作液0;0.5;1.0;1.5;2.0ml分别置于10ml试管内,在各管内加入冰乙酸,使总体积达4ml。沿管壁加2ml铁矾显色液,混匀,在15-90分钟内,560-575nm下比色。

  6.分析结果

  样品中胆固醇含量(mg/100g)=C×V/V‘×1/W×F/1000

  式中

  C=测得的光密度值在胆固醇标准曲线上显示的胆固醇量(μg)

  V=石油醚总体积(ml)

  V‘=取出的石油醚体积(ml)

  W=称取油脂重量(g)

  F=样品的脂肪含量(g/100g)

  1/1000=折算成每100克食物中胆固醇的毫克数。

  7.注意事项

  同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10%。